戴安液相色譜柱使用一段時間后，總會有一些雜質(zhì)累積在柱內(nèi)，保留值較弱的物質(zhì)，一般能快速從色譜柱沖洗出來，不產(chǎn)生干擾；中等保留強度的雜質(zhì)能被緩慢沖洗出來，但對分析產(chǎn)生一定的干擾；強保留雜質(zhì)通常聚集在柱頭或色譜柱中，難以被洗脫，甚至可能與填料發(fā)生相互作用，形成新的偽固定相，改變色譜柱的分離性能。通常表現(xiàn)為柱壓升高、基線不平、色譜雙峰、分離性能降低等。這些被污染的色譜柱經(jīng)清洗后，可恢復(fù)部分甚至大部分離能力。因此使用后認(rèn)真、定期清洗，不僅能延長色譜柱的使用壽命，節(jié)省資源，還能大大降低分析的成本。以我們常用的硅膠基質(zhì)色譜柱為例，簡要闡述常用色譜柱的清洗與再生。
1、色譜柱的清洗與再生
戴安液相色譜柱的使用前后都需經(jīng)較強的流動相沖洗。通常情況下，在使用硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱時，每次用完后可先用二氯甲烷或正己烷等溶劑低流速長時間的沖洗；鍵合反相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱可先用高比例的水（甲醇水混合溶劑）沖洗，再用100%甲醇沖洗。此外，色譜柱低流速的反相沖洗能夠有效除去堵塞在柱頭或篩板上的雜質(zhì)，以及清洗聚集在柱頭部位的較強吸附物質(zhì)。有些色譜柱在許多方法處理污染失效后，反過來使用，不僅柱壓降變小，柱效也可恢復(fù)如，延長了色譜柱的使用時間。
若上述常規(guī)清洗法無法清除污染物，則有必要采用更強的洗脫劑清洗，如反相材料的沖洗順序為：100%甲醇→100%乙腈→乙腈∶異丙醇(75∶25，V/V)→100%異丙醇?；蛘呖梢圆捎幂^低濃度的稀酸或稀堿可將有機溶劑不能洗脫的污染物除去。例如采用0.05mol/L的硫酸和流動相溶液沖洗色譜柱，可取得良好效果；或者采用1%氫氧化銨或50%二甲基甲酰胺水溶液，對聚集在柱頭的污染物具有良好的清洗效果。
如果分析時流動相中含有緩沖液（通常為鹽溶液），沖洗時宜用水取代緩沖液與有機相混合沖洗色譜柱（20倍柱體積）；再用100%有機溶劑沖洗。若直接用100%有機溶劑沖洗，可造成緩沖液沉積析出，從而損壞柱子品質(zhì)。同樣的，若流動相中加入酸、堿溶液時，也應(yīng)當(dāng)按照上述方法，先采用高比例的水（水：甲醇10:90）沖洗20倍柱體積，防止強酸強堿溶液導(dǎo)致硅膠基質(zhì)填料的溶解。
蛋白質(zhì)對反相色譜柱的污染已成為常見問題，尤其在分離未經(jīng)處理的動物組織等生物樣品。一般情況下，純有機溶劑如乙腈或甲醇不能很有效地清洗色譜柱，因而需要一些特殊的清洗方法。首先嘗試用高比例強極性溶劑的流動相進行沖洗，如乙腈∶異丙醇（1:2,V/V）；或使用0.1%的C?HF?O?水溶液或者0.1%乙酸水溶液清洗。此外，還可以采用1%十二烷基硫酸鈉 (SDS)，然后用5%～95%乙腈/水（含0.1%TFA）梯度沖洗，去除蛋白污染物效果也較好。
若采用上述的條件清洗后色譜柱仍不能達到理想的效果，有必要將固定相從色譜柱內(nèi)取出，進行清洗再生后重新裝填。具體操作是：將色譜固定相從色譜柱內(nèi)打出后，用甲醇浮選，去除其中細(xì)小的破碎顆粒；然后用二甲基甲酰胺、丙酮、甲醇超聲清洗；最后干燥固定相，重新裝填色譜柱。經(jīng)該方法處理的色譜柱，性能可得到顯著提高。
2、色譜柱的保存
戴安液相色譜柱的保存應(yīng)按照使用說明書中所指明的溶劑進行填充，盡可能的貯存于100%有機溶劑。色譜柱不能貯存在水或含水量高的溶劑中，會引起微生物的滋生，影響色譜柱壽命。如反相色譜柱長期不用，最好采用90%~95%的有機溶劑混合水溶液保存，防止色譜柱因密封不嚴(yán)造成色譜柱兩頭干涸、斷層引起的壽命縮短。
